环亚集团提供的一种经典人肺癌细胞系A549于1972年由GiardDJ通过肺癌组织移植而建立，源自一位58岁白人男性患者。其培养条件为：气相组成95%空气与5%二氧化碳，培养温度设定为37℃。A549细胞系具有合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂的能力，是通过胞苷二磷脂酰胆碱途径实现的，并且该细胞系为角蛋白阳性。

A549细胞广泛应用于肺癌研究、药物开发及分子机制探讨。该细胞系于1972年从一名58岁男性肺腺癌患者的胸腔积液中分离建立，由美国典型培养物保藏中心（ATCC）收藏。以下为传代及细胞处理的具体方法：

细胞传代方法

细胞传代的初步建议为1:2比例进行。每两天更换培养液，确保细胞在最佳状态下生长。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况，待细胞大部分变圆并脱落后，加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代并添加新完全培养基至5-8ml/瓶，存回37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 采用半换液法，竖直放置培养瓶，静置1小时后轻吸去3ml培养基，再补充3ml完全培养基。
2. 如需分瓶，可将细胞悬液收集并进行1000rpm离心5分钟，弃去上清，加入新培养基重悬后按1:2比例分瓶。

细胞冻存及复苏

环亚集团建议在细胞生长至覆盖培养瓶的80%表面积时进行冻存。冻存步骤如下：

1. 弃去培养液，PBS洗涤一次；
2. 添加胰蛋白酶消化液1ml，观察细胞回缩后加入5ml完全培养基终止消化，轻吹使细胞脱落并转移至离心管。
3. 1000rpm离心5分钟，弃去上清，沉淀细胞并加入1ml无血清冻存液，混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，若后期要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时后再转入。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速放入37℃水浴解冻，待无结晶后用75%酒精擦拭外壁；
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀重悬于5ml完全培养基后接种至T25培养瓶，放置37℃、5%CO2培养；
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项

在细胞运输过程中，部分贴壁细胞可能会脱落，若脱落较多，可收集培养液并进行处理。若细胞出现问题，环亚集团提供详细的售后服务。请及时反馈收到细胞后的状态，若符合重发条件，我们将积极处理。

重发与不重发情况

我们将依据细胞运输、污染及活性等因素，评估是否重发。同时，客户在收到细胞后的处理和培养方式也直接影响重发的判断。如您有任何疑问，欢迎与环亚集团联系，我们将竭诚为您服务。